Az enterobaktériumok és egyes vibriók differenciális meghatározásában a Voges-Proskauer reakció különleges helyet foglal el. A teszt a baktériumok azon képességén alapul, hogy a glükózt acetoinná erjesztik.
A kutatási folyamat lényege
A mikrobiológiában a Voges-Proskauer reakciót gyakran használják az enterobaktériumok Yersinia családján belül (beleértve a pseudotuberculosis és enterocolitis kórokozóit), az Escherichia coli és a spóraképző aerobok megkülönböztetésére. Az eredményt a közeg színezése teszi láthatóvá bizonyos reagensek hozzáadásakor.
Ez a teszt az IMViC sorozathoz tartozik (az Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate rövidítése) – az azonosítási tesztek egy csoportja, beleértve a különbségi meghatározásokat:
- indollal, a triptofán indollá történő lebontása alapján, Kovács- vagy Ehrlich-reagens jelenlétében alkalmazva;
- használmetilroth vagy metilvörös, amely a glükóz metabolizmus eredményeként egy adott pH-t érzékel;
- Voges-Proskauer reakciók acetil-metil-karbinol kimutatására;
- citrát hasznosítása színváltozással a közeg lúgosítása következtében.
A folyamat lényege a diagnosztizált baktériumok jelenlétének megjelenítése az általuk képződött acetoin és a maró kálium kölcsönhatása miatt oxigén jelenlétében. Az acetil-metil-karbinol diacetillé oxidálódik, amely élénkvörös vagy rózsaszínű vegyületet képez. Növelje a teszt érzékenységét alfa-naftol hozzáadásával a maró hamuzsír hozzáadása előtt.
Tesztbeállítás
A Voges-Proskauer reakció megfogalmazása magában foglalja a mikroorganizmusok előzetes tenyésztését. A tiszta tenyészetet Clark-féle differenciáldiagnosztikai táptalajra vetik, amelynek egy változata a Clark-leves (agar-agar hozzáadása nélkül). Vagy kész tápközeget használnak, vagy önállóan készítik el. Hozzávalók:
- 5g pepton;
- 5g glükóz;
- 5g kétbázisú kálium-foszfát;
- 1L párlat.
A vizsgálat során a tenyészetet steril bakteriológiai hurokkal oltják be folyékony táptalajba. Mennyiség - 5 ml kémcsőben plusz kontroll. Az inkubálást 35-37 fokos hőmérsékleten két napig végezzük. Ezt követően a Voges-Proskauer-reakció vizsgálatát szakaszosan végezzük:
- 2, 5 ml húsleves tenyészetet átviszünk egy steril csőbe.
- Adjon hozzá hat csepp alfa-naftolt (5%-os alkoholos oldat).
- 40% hozzáadásamaró kálium oldata 0,1 ml mennyiségben vagy két csepp.
- A keverést a kémcső finom rázásával végezzük.
- Értékelje ki az eredményt a kísérlet kezdetétől számított 15 perc elteltével.
Egy alternatív vizsgálati módszer az éjszakai inkubáció, amelynek időtartama 18 órára vagy legfeljebb egy napra csökken. Ezen a módszeren kívül expressz tesztet is alkalmaznak: 2 ml táptalajba hurokban tenyészetet viszünk be, körülbelül négy órán át inkubáljuk, majd 2-3 csepp egyenlő mennyiségben hozzáadjuk a reagenseket, összekeverjük és a az eredményt tíz perc múlva értékeljük ki.
A kontroll a tüdőgyulladás Klebsiella pneumoniae - atcc 13883 törzs egyik kórokozója.
Az eredmény értékelése
A reagensek hozzáadása után a szükséges idő elteltével (5-15 perc) cseresznyevörös színt kell figyelni kifejezett pozitív reakcióval, vörös és rózsaszín - gyenge pozitív reakcióval. Nincs változás negatív eredményként rögzítve.
Az oldatban lévő maró hamuzsír feleslege pozitív reakciót imitálhat, és réz színűvé válik. Ebben az esetben fel kell jegyezni a vizsgált telep negatív válaszát. A rézfestés olyan esetekben is megjelenik, amikor az értékelést egy órával a reagensek bevezetése után adják meg.
Az eredmény értékelésekor figyelembe kell venni, hogy a vizsgált mikroorganizmusok hosszan tartó tenyésztése (három napnál tovább) a táptalaj elsavasodásához vezet, ami a vizsgálat helytelen kimeneteléhez vezethet. A reakció enyhén pozitív, illhamis negatív.
A tesztreagensekre vonatkozó követelmények
A Voges-Proskauer reagenseknek meg kell felelniük olyan követelményeknek, mint a megfelelő koncentráció, a nagy tisztaság és a stabilitás, ami a megfelelő tárolással érhető el.
A használatra kész tesztkészletek jellemzően 100 vagy több felhasználásra alkalmas reagenseket tartalmaznak, és műanyag vagy színezett üveg fiolákban érkeznek. A minőséget a vonatkozó dokumentáció szabályozza.
